1.检查用的胶的浓度和靶标蛋白的分子量是否适合 

2.上样量过高，有的人怕蛋白太少，蛋白浓度又低，蛋白加的太多，一般上样量20-25ug即可 

3.样品离子浓度高 

4.拔完梳子后，加样孔有残留的胶，这样上样量就少了，因此建议，拔梳子后一定要用水把残留的胶冲净，但也要注意，水一定要吸干，否则和残留胶一样会导致同样的结果。 

5.拔梳子时不要左右摇动，避免破坏加样孔底部。 

6.上样要迅速，否则会引起样品扩散。 

7.上样与跑电泳之间的间隔太长,尽量缩短时间间隔。 

8.装配三明治结构要迅速。 

9.电泳的电压太高，发热导致扩散。 

10.降低一抗浓度。 

11.可以适当缩短曝光时间。 

12.10%APS现配现用,APS长期存放也会引起同样的问题。